Immunochemical and sub-structural characterization of sheep lung cytochrome P450LgM2
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyolojik Bilimler Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 1993
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: TALAL MOHAMMED ABU-BAKER
Danışman: ORHAN ADALI
Özet:oz KOYUN AKCİ?ER SITOKROM P450LgM2'nin İMMÜNOKİMYASAL VE ALTYAPISAL KARAKTERİZAS YONU ABU-BAKER, Talal Yüksek Lisans Tezi, Biyokimya Anabilim Dalı Tez Yöneticisi: Doç. Dr. Orhan ADALI Yardımcı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Emel ARINÇ Kasım 1993, 102 sayfa Akciğer havada bulunan çeşitli kirleticilerin ve potansiyel karsinoj enlerin esas giriş kapısı olduğu için, sitokrom P450 enzimlerinin akciğerde özel bir önemi vardır. Çeşitli türlerin akciğerleri, benzerlikler gösteren sitokrom P450 tiplerine sahip olmasına rağmen, aralarında bazı önemli farklılıklar olabilir. Koyun akciğer sitokrom P450LgM2 izozimi deterjan ile çözünürleştirilmiş koyun akciğer mikrozomlarından, dört kromatografik basamak kullanılarak saflaştırıldı ve laboratuvarımızda daha önce geliştirilen metotlar kullanılarak sitokrom P450LgM2'ye karşı tavşanlarda antikor üretildi. P450LgM2 antikorlarının sitokrom P450LgM2 tarafından katalize edilen reaksiyonlara etkisi incelendi. Koyun akciğer mikrozomlannm benzfetamin N-demetilaz aktivitesi P450LgM2 antikorları tarafından tamamen inhibe edildi. Akciğer mikrozomlarına benzer olarak, saflaştırılmış koyun akciğer sitokrom P450LgM2 veya fenobarbital (PB) ile muamele edilmiş tavşan karaciğer sitokrom P450LM2 ile rekonstitute (yeniden oluşturulan) sistemlerin benzfetamin N-demetilaz aktivitesi, birbiri ardına,P450LgM2 antikorları tarafinden %95 ve %82 oranlarında inlıibe edildi. P450LgM2 antikorlarının inlıibisyon etkisi, koyun akciğer mikrozomlarınm ve saflaştınlmış koyun akciğer sitolcrom P450LgM2 ile rekonstitute sistemin etilmorfîn N-demetilaz aktivitesinde de gözlendi. Etilmorfîn N-denıetilasyon reaksiyonunun sonuçlan, akciğer mikrozomlarında %80, rekonstitute sistemde %50 oranlarında inlıibisyon olduğunu gösterdi. Koyun akciğer mikrozomlannm anilin 4- hidroksilaz aktivitesi, P450LgM2 antikorları tarafından %62 oranında inlıibe edildi. Koyun akciğer sitokrom P450LgM2 ve PB-tavşan karaciğer sitolcrom P450LM2 (IIB4) izozimleri, kimotiripsin ve papain kullanılarak kısmi proteolize tabi tutulduğunda, oluşan peptitler SDS-poliakrilamit jel elektroforezi ile analiz edilip, gümüş boyaması ile gözlemlendiğinde, ufak farklılıklar (genelde benzer) göstermiştir. Ayrıca, koyun akciğer sitokrom P450LgM2 izozirninin NH?- terminalindeki amino asiti, farklı solvent sistemleri kullanılarak silika jel ince tabaka kromatografisi ile analiz edildiğinde, metionin olarak bulunmuştur. Anahtar kelimeler: Koyun akciğer mikrozomları, akciğer sitokrom P450LgM2, peptit haritası, NH2-terminal asit analizi, biyokatalitik aktivite, antikor inhibisyonu. Bilim dalı Sayısal Kodu: 401.01.05, 405.05.01, 101.04.01 vı