Optimisation of tissue culture conditions and gene transfer studies in lentil
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Mühendislik Fakültesi, Gıda Mühendisliği Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2000
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: MEHRZAD MAHMOUDİAN
Eş Danışman: HALUK HAMAMCI, HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM
Özet:93^7- öz MERCİMEKTE DOKU KÜLTÜRÜ ŞARTLARININ OPTÎMÎZASYONU VE GEN TRANSFER ÇALIŞMALARI Mahmoudian, Mehrzad Doktora, Biyoteknoloji Bölümü Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Hüseyin Avni Öktem Ortak Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Haluk Hamamcı Ağustos 2000, 140 sayfa Bu çalışmada, Sultan- 1 ve Fırat-87 mercimek çeşitlerinde doku kültürü koşullarının optimizasyonunu ve Agrobacterium infiltrasyonuna ve partikül bombardrnanına dayalı transformasyon sistemleri araştırılmıştır. Dolaylı ve dolaysız organogenesis, bu çalışmadaki in vitro regenerasyonunun iki temel yolunu oluşturmaktadır. Çalışmadaki regenerasyon deneyleri boyunca, regenerasyon için belirleyici rolü bilinen üç önemli faktör, yani genotip, eksplant türü ve hormon kompozisyonları incelenmiştir. Dolaylı organogeneziste, üç değişik eksplant türünün regenerasyon tepkisi, üç değişik büyüme ortamında incelenerek, araştırılmıştır. Her iki çeşidin boğum içeren parçaları, 0.1 mg/L GA ve 10 mg/L Kinetin içeren ortamlarda, kallogenesis ve sürgün regenerasyonu açısından, en iyi sonuç veren eksplantler olarak belirlenmiştir.Dolaysız organogeneziste ise, 1 mg/L BAP içeren ortamlarda tutulan kotiledon bağlantılı boğumlar, regenerasyon sistemi olarak kullanılmış ve sürgün oluşturmak için, potansiyeli yüksek eksplantlar olarak tespit edilmiştir. Bu nedenle bahsi geçen eksplantlar transformasyon çalışmalarında kullanılmıştır. Regenere olmuş sürgülerinin köklendirilmesinde, 0.1 mg/L IAA veya 0.1 mg/L EBA içeren köklendirme ortamlarının ile mikrografting tekniğinin üstünlüğü saptanmıştır. Transformasyon deneylerinde Agrobacterium tumefaciens GV2260:pGUSINT ve, pBSGUSINT transformasyon vektörü kuUamlmıştır. Transformasyon sisteminin verimliliği, geçici gen ifadesinin histokimyasal GUS analizi ile belirlenmesiyle saptanmıştır. Bu analizler sonucunda, mercimekteki kotiledon bağlantılı boğumlarda her iki transformasyon sistemininde, genetik transformasyon için kullanılabilirliği tespit edilmiştir. Anahtar Kelimeler: Mercimek, Organogenezis, Agrobacterium, Vakum Infiltrasiyonu, Mikroprojektil Parçacık Bombardmanı, GA, Kinetin, BAP, GUS vı