Aqueous two-phase separation of xylanases produced by a bacillus sp.

SUZAN BİRAN

Aqueous two-phase separation of xylanases produced by a bacillus sp.

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Mühendislik Fakültesi, Kimya Mühendisliği Bölümü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2001

Tezin Dili: İngilizce

Öğrenci: SUZAN BİRAN

Danışman: LEVENT YILMAZ

Özet:

OZ BİR BACİLLUS SUŞUNDAN ELDE EDİLEN KSİLANAZLARİN SULU İKİ-FAZ YÖNTEMİYLE AYRIŞTIRILMASI Biran, Suzan Yüksek Lisans, Gıda Mühendisliği Bölümü Tez Yöneticisi: Doç. Dr. Ufuk Bakır Yardımcı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Levent Yılmaz Eylül 2001, 80 sayfa Bu çalışmanın amacı. Bacillus ksilanazlarının, polietilen glikol (PEG) ve potasyum fosfattan oluşan sulu iki faz sistemi kullanarak fermantasyon ortamından ekstrakte edilmesidir. Enzim ekstraksyonundan önce, iyi bir ksilanaz üreticisi elde etmek için, toprak mikroorganizmaları taranmıştır. Ayrıştırma işleminin optimizasyonu sıcaklık, polimer konsantrasyonu ve moleküler ağırlığı, tuz çeşidi, ortamın iyonik gerilimi ve sistemin pH'ı gibi parametrelerin etkileri araştırılarak yapılmıştır.Elde edilen sonuçlar ksilanazaların üst faza yoğunlaşarak ve saflaşarak tamamen ayrıştıklarını göstermiştir. En iyi sonuçlar %5.6 PEG4000, %18 potasyum fosfat, %9 Ki, pH 8.5 ve %3.5 PEG4000, %14 potasyum fosfat, %9 Ki, pH 9'dan oluşan sistemlerde elde edilmiştir. İlk kompozisyon, % 76 ksilanaz geri kazanımı ile enzim korunumu için; ikincisi ise 5 kat saflık ve 10 kat konsantrasyon ile enzim saflaştırılması için uygun bulunmuştur. Son olarak, ksilanazlar mikrobiyal hücreleri ihtiva eden fermantasyon ortamından ekstrakte edilmiştir. Tüm Bacillus hücreleri alt faza çekilmiştir; aynı zamanda da ksilanazların %69u korunarak 6 kat safiaştırılmış ve 4 kat konsantre edilmiş şekilde ayrıştırılmıştır. Çalışmalar göstermiştir ki ATPS yöntemi, enzim izolasyonu, konsantrasyonu ve kısmi saflaştırma işlemleri için hücre içeren fermantasyon ortamından bile yüksek enzim verimliliği ile sonuçlanan iyi bir yöntemdir. Anahtar sözcükler: İki Fazlı Sulu Sistem, PEG-Tuz Sistemi Enzim Ayrıştırılması, Ksilanaz, Bacillus. V!