Isolation and characterization of KG type yeast killer toxins
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyolojik Bilimler Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2000
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: ARMAĞAN SAĞIROĞLU (KOÇER)
Danışman: KADRİ FATİH İZGÜ
Özet:öz K6 TİPİ MAYA TOKSİK PROTEİNLERİNİN İZOLASYONU VE KARAKTERİZASYONU Koçer Sağıroğlu, Armağan Doktora Tezi, Biyoloji Ana Bilim Dalı Tez Yöneticisi: Doç.Dr. Fatih İzgü Eylül 2000, 100 sayfa Kluyveromyces marxianus mayasının toksik aktivitesinden sorumlu proteinleri incelendi. Aktivitede rol alan proteinler besi ortamından ayrıştırıldı. Bunlar, polyakrilamid jeller, molekül büyüklüğü ve pH gradiant jelleri, jel geçirgenlik kromatografileri, kromatofokusing, ultrafiltrasyon, jel içinde tripsin ile parçalanma ve MALDI-TOF mass spektrometri, N terminal ve internal sekans dizilimi belirlenmesi yöntemleri kullanılarak karakterize edildi. Ortamdaki ana protein, parçalayıcı olmayan jellerden izole edildi ve toksik aktiviteyi gösterdi. 42 kDa büyüklüğünde, şeker içermeyen, pl noktasi 5.02 olduğu bulunan bu proteinin, internal amino asit sekansdizilimi, bu proteinin, yine aynı organizmanın polygalacturonase precursor proteini ile yüksek homolojisi olduğunu gösterdi. Ana proteinin ortamdan uzaklaştırılmasından sonra geriye kalan fraksiyonda hala aktivite bulunmasi nedeniyle, bu fraksiyondaki proteinler de incelendi. Jel geçirgenlik, kromatofokusing ve ultrafiltrasyon deneyleri, bu fraksiyonun toksik karakterinden, birleşip ayrışabilen ve üç proteinden oluşan bir sistemin sorumlu olduğunu gösterdi. Bu proteinlerin şeker içerdiği ve pl noktalarının 4.6 olduğu bulundu. Amino asit sekans dizilimi sonuçları bu proteinlerden birinin Sacharomyces cerevisia'nın proteasome component SUN4, diğerininse yine aynı mayanın teorik ve fonksiyonu bilinmeyen bir proteini ile yüksek homolojisi olduğunu gösterdi. Üçüncü protein bilinen proteinlerin herhangi biriyle önemli bir benzerlik göstermedi. Sonuç olarak bu çalışmada K6 tipi maya toksik sisteminin toksik aktivitesinden dört tane proteinin sorumlu olduğu gösterildi. Bu proteinlerin büyük ölçekli izolasyonu ve daha ileri karakterizasyonu için gerekli karakterleri bulundu. Anahtar Kelimeler: Maya Toksik Proteinleri, Jel Geçirgenlik Kromatografîsi, Kromatofokusing, MALDI-TOF Kütle Spektrometrisi, Aminoasit Sekans Dizilimi, iyon-değişim Kromatografîsi. vı