Investigation of the effect of GPCR oligomerization on the GNAI1 homodimerization in live cells using FRET
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoteknoloji Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2022
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: ENİSE NALLI
Danışman: ÇAĞDAŞ DEVRİM SON
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:G-Protein Kenetli Reseptörler (GPKR), hücre zarını yedi kez geçen zar proteinleridir. Klasik GPCR sinyal yolaklarında, bir GPKR-bir heterotrimerik G protein etkileşim modeli, sinyali efektör proteinlere iletmek için yeterlidir. 2000'li yıllarda başlanan araştırmalar, bir GPKR dimer-bir heterotrimerik G-protein etkileşim modelinin daha olası olduğunu ve homo-/heterodimerleşen GPKR'lerin tek bir G⍺-proteini ile etkileşime girdiğini göstermiştir. Son zamanlarda, GPKR çalışmaları, sinyal iletimi sırasında aktif reseptör oligomerleri oluşturmak için ikiden fazla reseptörün entegre olduğunu göstermiştir. Navarro et al. GPKR dimerlerinin dimerizasyonuyla oluşturulan bir heterotetrametrik reseptör kompleksi içinde, bağlı G proteinlerinin etkileşim mesafesinde yakın hale getirildiğini gösterilmiştir (Navarro ve diğerleri, 2018). Ayrıca, G-protein ailesinin üyesi olan Ras proteinleri ile yapılan çalışmalar, bu proteinlerin reseptörden bağımsız dimer oluşturduğunu göstermiştir ve bu dimerlerin farklı sinyal yolaklarında önemli roller oynadığı saptanmıştır. Yakın zamanda, laboratuvarımızın bir üyesi olan Özge Atay, Gαi1 proteinlerinin hücre zarında fiziksel etkileşimini göstermiştir. Fakat, Gαi1 protein homodimerlerinin GPKR tetramerlerinin oluşumunun bir sonucu olup olmadığı henüz açık değildir. Bu bilgiler ışığında, GPCR oligomerizasyonunun Gαi1 homodimerizasyonu üzerindeki etkisi iki kondisyon içinde kantitatif olarak Förster Rezonans Enerji Transferi (FRET) yöntemi ile araştırılmıştır: (1) GPCR-Gαi1 etkileşiminin Gαi1'e özgü minigenlerle bloke edilmiş ve (2) Quinpirole uygulaması ile reseptör oligomerizasyonu tetiklenmiştir. Anahtar Kelimeler: Gαi1 protein, Homodimer formasyonu, Receptor oligomerizasyonu, Receptor bagımlılığı, FRET