Genetic transformation of tobacco with Hs1(pro-1) gene and evaluation of nematode resistance in transgenic plants
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyolojik Bilimler Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2001
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: ÇAĞLA ALTUN
Danışman: HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM
Özet:öz TÜTÜN BİTKİSİNİN Hslpro'1 GENİ İLE GENETİK TRANSFORMASYONU VE TRANSGENIC BİTKİLERDE NEMATOD DÎRENÇLÎLİĞ1 ANALİZİ Altun, Çağla Yüksek Lisans, Biyoteknoloji Bölümü Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Hüseyin Avni öktem Ortak Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Halil Elekçioğlu Eylül 2001, 82 sayfa Bitki paraziti nematodlar, tüm nematodların % 10'unu oluştururlar ve bitkilerin en önemli hayvan parazitleridir. Bütün dünyada yıllık % 10-25 arası ürün kaybına neden oldukları bilinmektedir ve bu kayıp yıllık yaklaşık 100 milyar dolarla ifade edilmektedir. Bu çalışma, nematod dirençliliği sağladığı kanıtlanan Hslpro~1 genini Agrobacterium yoluyla tütün bitkisine aktarmayı ve nematod dirençli transgenik bitkiler elde etmeyi amaçlamaktadır. Bu amaçla, bir Agrobacterium suşu olan EHA105'e elektroporasyon yöntemiyle Hslpro'1 genini taşıyan plasmid pDNEM33 aktarılmıştır. Elde edilen yeni bakteri, EHA105::pDNEM33, bitki transformasyon çalışmalarında kullanılmıştır.Transformasyon çalışmaları sonrasında bitkiler değişik PPT konsantrasyonu içeren besi yerlerinde rejenere edilmiştir ve bu bitkiler üzerinde transgenik olduklarım kanıtlamak amacıyla çeşitli testler uygulanmıştır. Yabani ve transgenik bitkilerde uygulanan yaprak diski testi ve klorofenol kırmızısı testleri yabani bitkilerle karşılaştırıldığında transgenik bitkilerin pozitif sonuçlar verdiğini ortaya koymuştur. Ayrıca, bitki DNAları üzerinde yapılan PCR Analizi ve Southern Blot Hibridizasyonu da HsJpro'1 geninin bitki DNAsına entegre olduğu sonucunu vermişlerdir. Son olarak, Fİ jenerasyonu üzerinde iki farklı nematod türü olan Meloidogyne incognita ve M. javanica ile bioassayler gerçekleştirilmiştir. Nematodlar enfekte edildikten 20 gün sonra incelenen yabani ve transgenik bitki kökleri 0-10 Gal İndeksi Skalasına göre numaralandırılmış ve yabani ve transgenik bitki kökleri arasında belirgin bir farklılık olup olmadığı ANOVA testi ile belirlenmiştir. Bu testin sonucuna göre bitki kökleri arasında istatistiksel olarak belirgin bir farklılık olduğu sonucuna varılmıştır. Bu sonuç göstermektedir ki; yabani bitkilerle karşılaştırıldığında, transgenik bitkiler nematod zararlısından daha az etkilenmiştir. Anahtar Kelimeler: Bitki paraziti nematodlar, nematod dirençliliği, Hslpro~1 geni, transgenik tütün, Agrobacterium vı