Isolation and characterization of the K9 type yeast killer protein
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyolojik Bilimler Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2003
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: EDA BENER
Danışman: KADRİ FATİH İZGÜ
Özet:Öldürücü fenotipe (K4) sahip bazı maya suşları bulundukları ortama "öldürücü proteinler" ya da "öldürücü toksinler" adı verilen polypeptid toxin salgılar. Bu öldürücü proteinlerin bazdan yalnızca bazı maya türlerinin büyümelerini engellemekle kalmaz, ayrıca bazı Gram (+) hastalık yapıcı bakterilerin de büyümelerini engeller. Maya öldürücü proteinlerinin ümit verici antimikrobiyal ajanlar olması nedeniyle, bu çalışmada K9 tipi maya öldürücü proteinini Hansenula mrakii NCYC 500 suşunu kaynak suş olarak kullanarak izole ve karakterize etmeyi amaçladık. Yapılan öldürme alanı testi sonuçlarına göre, K9 tipi öldürücü proteinin optimum üretim şartlarının pH 4.6 ve 26 °C de gerçekleştiği belirlendi. Kültür ortamında salınan proteinler ultrafiltrasyon yöntemiyle konsantre edildi ve amonyum sülfat çöktürmesi yöntemiyle fraksiyonlara ayrıldı. K9 tipi maya toksik proteini, doğal halinde, preparatif tüp jellerden izole edildi ve izole edilen protein öldürücü aktivite gösterdi. İzole edilen K9 tipi maya toksik proteinin 38 kDa büyüklüğünde bir protein olduğu "SDS-PAJE" yöntemiyle bulundu. Bu proteinin izoelektrik noktasının 4.7 ile 4.8 arasında olduğu yüksek voltajlı dikey jel elektrofokuslama yöntemiyle gösterildi Bu proteinin yapısında şeker olmadığı "western blotlama ve glikoanaliz" yöntemiyle bulundu. İzole edilen proteinin termal stabilite ve pH stabilite özellikleri öldürme alanı testi ile araştırıldı. K9 tipi maya toksik proteinin izolasyonunun ve moleküler kütle, izoelektrik nokta ve glikozilasyonu bakımından karakterizasyonunun, bu proteinin endüstriyel amaçlı büyük ölçekte üretimine katkıda bulunması beklenmektedir. Anahtar kelimeler: Hansemıla mraHi, maya öldürücü proteinleri, K9 tipi maya öldürücü proteini