Pseudomanas aeruginosa ses-938-1 elastase : Isolation microbiological and biochemical characterizations
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyolojik Bilimler Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 1994
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: M.EZGİ ERGİN
Danışman: SEMRA KOCABIYIK
Özet:oz PSEUDOMONAS AERUGINOSA SES - 938 - 1 ELASTAZ İZOLASYONU, MİKROBİYOLOJİK VE BİYOKİMYASAL KARAKTERİZASYONU ERGİN, Ezgi Yüksek Lisans Tezi, Biyoteknoloji Anabilim Dalı Tez Yöneticisi : Doç.Dr. Semra Kocabıyık Nisan, 1994,104 sayfa Elastaz P. aeruginosa tarafından üretilen birçok hücre dışı hastalık yapıcı faktörler arasında patojeniteden en çok sorumlu tutulanıdır. Pseudomonas elastazının ayrıca, bir dipeptit tatlandırıcı olan aspartamın sentezinde de etkin olabileceği bulunmuştur. Çok çeşitli kaynaklardan izole edilen P. aeruginosa suşlarının çoğu elastaz aktivitesine sahiptirler. Bu çalışmada, elastaz üretimi ile enzimin bazı biyokimyasal özellikleri incelenmiştir. Deneylerde, 28 P. aeruginosa susu arasında en yüksek elastaz aktivitesine sahip olan P. aeruginosa SES - 938 - 1 susu kullanılmıştır. Enzim çalışmalarında kullanılan elastaz preparasyonu, filtre edilmiş kültür süpernatantının, amonyum sülfat çöktürmesinden sonra bir "Centricon" ultrafiltrasyon aparatı kullanılarak tuzlardan arındırılması ve konsantre edilmesi sureti ile hazırlanmıştır. Aktiviteler, 36°C sıcaklıkta 100 mM TrisHCI, 10 mM CaCİ2 pH 7.5 tampon çözeltisinde ve substrat olarak N- succinyl-L-(ala)3-p-nitroanilid ' in varlığında ve 410 nm ' de absorbans okunarak ölçülmüştür.Elastaz aktivitesi 0.067 - 0.540 mM ' lık substrat konsantrasyonunda Michaelis - Menten Kinetiğine uymakta olup, görünür Km değeri 0.379 mM olarak bulunmuştur. Yüksek substrat konsantrasyonlarında ( > 0.500 mM ) inhibasyon görülmüştür. Optimum aktivite, 36°C sıcaklıkta ve pH 7.5 iken gözlenmiştir. Elastaz aktivitesi, EDTA ve EGTA gibi metal bağlayıcı ajanlar ve yüksek konsantrasyonlarda bazı metaller ( Mn2+, Ni2+, Zn2+ ) tarafından inhibe edilmiştir. Enzim, 36°C sıcaklıkta 90 dakika süre ile inkübe edildiğinde total aktivitesinin %90 ' ına sahip iken, 56°C sıcaklıkta 15 dakika inkübasyondan sonra hiçbir aktivite görülmemiştir. Elde edilen bu sonuçlara göre, P. aeruginosa SES - 938 - 1 elastazı bir nötral metalo - proteazdır. Anahtar Kelimeler : Elastaz, Pseudomonas aeruginosa, nötral metalo - proteaz, antibiyotik dirençliliği. Bilim Dalı Sayısal Kodu : 401. 01. 04. vı