Regulation of delta-endotoksin biosynthesis and endospare formation in Bacillus Thuringiensis
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyolojik Bilimler Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 1995
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: YASEMİN TAYANÇ
Danışman: GÜLAY ÖZCENGİZ
Özet:Öz BACILLUS THURİNGİENSİS &VDE DELTA-ENDOTOKSİN BİYOSENTEZİ VE ENDOSPOR OLUŞUMUNUN DÜZENLENMESİ Tayanç, Yasemin Yüksek Lisans Tezi, Biyoloji Bölümü Tez Yöneticisi: Doç.Dr. Gülay Özcengiz Yardımcı Tez Yöneticisi: Prof.Dr. N.Gürdal Alaeddinoğlu Temmuz 1995, 95 sayfa Bu çalışmada, Bacillus thuringiensis' in bir yerli izolatında (B. thuringiensis 81) 8-endotoksin (kristal protein) biyosentezi ve sporlanmanın fizyolojik regülasyonu araştırılarak bu proteinin üretiminin arttırılması amaçlanmıştır. B. thuringiensis 81 'de 8-endotoksin sentezinin, sporulasyon prosesini de stimule eden bir besiyeri olan Yousten's Synthetic Medium'da (YSM) en yüksek olduğu bulunmuştur. Sporlara özgün kristallerin oluşumu durağan fazlabirlikte başlamış ve bu, inkübasyonun ö.saatine (T6) karşılık gelmiştir. SPY ve LB ortamlarında toksin üretimi oldukça gecikmiş ve sırasıyla T,4 ve T40'da başlamıştır. Besiyerlerinin tümünde, fermantasyonun geç aşamalarında kristal proteinin parçalanarak kaybolduğu gösterilmiştir. Kristal protein sentezi ve sporulasyon lOOmM MOPS ile tamponlanmış YSM ortamının başlangıç pH'sı 6.5-7.0 olacak şekilde ayarlandığı zaman daha etkin olmuştur, bu da bu proseslerin fermantasyon boyunca besiyerinin pH'sındaki değişikliklerden etkilendiklerine işaret etmiştir. YSM ortamına Mg ve Cu'nun belirli konsantrasyonlarının ilavesinin yüksek seviyede 8-endotoksin sentezi için gerekli olduğu gösterilmiştir. Diğer yandan, Ca, Fe, Zn ve Mn'nin herhangi bir pozitif düzenleyici etkisi olmadığından bu minerallerin besiyerinden uzaklaştırılabileceği sonucuna varılmıştır. Bu minerallerin kristal protein oluşumu ve sporulasyonu koordine biçimde regule etmedikleri not edilmiştir. Laktoz, sukroz ve inulin'in kristal protein sentezini ve sporulasyonu stimule eden karbon kaynaklan oldukları belirlenmiştir. Ucuz ve kolay temin edilir olmaları nedeniyle endüstriyel ölçekte kristal protein sentezi için çok uygun substratlar olan peynir altı suyu ve melas kullanıldığında, biyosentezin oldukça yüksek olduğu bulunmuştur. Gliserol, glukoz, maltoz, nişasta ve dekstrin gibi diğer karbon kaynakları, toksin üretiminin azalmasına neden olmuştur.Kristal protein sentezi üzerine en önemli kontrollann nitrojen kaynakları tarafından uygulandığı saptanmıştır. En yüksek seviyede kristal protein sentezini sağlaması nedeniyle, peptonun en uygun organik nitrojen kaynağı olduğu gösterilmiştir, inorganik nitrojen kaynaklarının etkileri oldukça karmaşık olup 135 ve 65 kDa protein komponentlerinin sentezinin kullanılan inorganik nitrojen kaynağının çeşidi ve konsantrasyonu tarafından belirlendiği görülmüştür. 135 ve 65 kDa proteinlerin sırasıyla crylve cryll olmak üzere iki ayrı gen ürünü oldukları ileri sürülmüştür. Anahtar Kelimeler : 8-endotoksin (Kristal protein); B. thuringiensis 81 ; Biyoinsektesit; Biyosentez; Sporlanma; Regulasyon.