Isolation and immunologic characterization of theta class glutathione S-transferase GSTT2-2 from bovine liver
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2004
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: SULTAN BELGİN İŞGÖR
Danışman: NURSEN ÇORUH
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Glutatyon-S-transferazlar (GST) elektrofilik yapıdaki ksenobiyotikler ve bazı endojenlerin detoksifikasyonlannda rol oynayan aym zamanda reaktif oksijen metabolitlerinin nükleofil tutan tripeptid yapısındaki glutatyona konjugasyonunu sağlayarak vücudu koruyan bir enzim grubudur. Ökaryotlarda ve prokaryotlarda, sitoplazmada, mikrozomlarda ve mitokondride bulunurlar. Sitozolik GST 1er altı grupta toplanırlar; alfa, mu, pi, sigma, zeta ve teta Diğer GST'Ierle karşılaştırıldığında, teta sınıfı GST'lerin izolasyonuy ve karakterizasyonu oldukça zordur. İnsanda; GSTTl-1 ve GSTT2-2 olmak üzere iki, siçanda rGSTTl-1, rGSTT2-2 ve 13-13 olmak üzevvre üç, ve fare de bir tane teta sınıfı GST' leri tanımlanmıştır. Bu çalışmada, 1-MS ' a karşı yüksek aktivite içeren teta sınıfı GSTT2-2 izoziminin sığır karaciğerinden %3 lük ürün ve yine 3 kat saf olarak izolasyonu ve saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek aktiviteye sahip sitozolik fraksiyonun sırasıyla DEAE anyon değişim, S- hexylglutatyon afmite, Oranj A ve kromatofokuslama kolonlanna uygulanmasıyla elde edilmiş, protein miktarı ve 1-MS' a karşı enzim aktivitesi son kolondan sonra hızla düşmüştür. Saflaştınlan numune sadece 1-MS'a karşı 77 nmole/min/mg değerinde aktivite göstermiştir. Saflaştınlan sığır karaciğeri GSTT2-2 izoziminin SDS-PAGE ile molekül ağırlığı (Mr) 28,200 olarak bulunmuş bu sonuç Western Blot sonucu ile de desteklenmiştir. Saflaştınlan numune diğer kolon fraksiyonlan ile beraber anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu ve antiGST pi antikorlan ile test edilmiştir. Enzim aktivitesleri 1-MS, CDNB ve 4-NBC substartlan kullanılarak tayin edilmiştir.Anahtar kelimeler: Glutatyon S-transferazIer, Teta sınıfı GST'ler, Saflaştırma, Western Blot, Karakterizasyon.