Isolation and immobilization of NADH-cytochrome b5 reductase from rabbit liver
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 1992
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: ÖZLEM ESEN YILDIRIM
Danışman: URAL AKBULUT
Özet:NADH-sitokrom b5 redüktaz (EC 1.6.2.2) enzimi tavşan karaciğer mikrozomlarından izole edilmiştir. Daha sonra bu enzim krom (III) asetat, krom (Di) sülfat ve potasyum krom (IH) sülfat kullanılarak kimyasal çapraz bağlama yöntemi ile fotoğrafik jelatin içine immobilize edilmiştir. Hazırlanan film striplerinin enzim sızıntısı kontrolleri fosfat tamponu (0.1 M, pH 7.5) ile yıkanarak yapılmıştır. Bağlanmamış enzim miktarı yıkama çözeltisindeki enzim aktivitesinin spektrofotometrik yöntemle tayin edilmesiyle bulunmuştur. Çapraz bağlayıcı, jelatin ve enzim konsantrasyonunun enzimatik aktivite üzerindeki etkileri çalışılmıştır. Serbest ve immobilize edilmiş NADH-sitokrom b5 redüktaz enzimi için substrat konsantrasyonu, kofaktör konsantrasyonu, pH, sıcaklık ve saklama şartları optimize edilmiştir. Sürekli kullanımın ve dinlendirmenin immobilize edilmiş enzim aktivitesi üzerine etkileri saptanmıştır. Mekanikkararlılık ve sızıntının jelatin ve çapraz bağlayıcı konsantrasyonlarına bağımlı olduğu bulunmuştur. Ayrıca immobilize edilmiş NADH-sitokrom b5 redüktaz enziminin ısıya karşı serbest redüktaz enzimine göre daha kararlı ve dirençli olduğu gözlenmiştir. Anahtar Kelimeler : Immobilize edilmiş NADH - sitokrom b5 redüktaz, fotografîk jelatin, krom (IH) asetat ile çapraz bağlama. Bilim Dalı Kodlan : 401.01.05, 405.05.01, 101.04.01 vı